酒精性肝病的診斷以肝活檢病理診斷較明確，可以幫助分類及瞭解病變程度。實驗室酶學檢查，結合臨床影像，有輔助診斷意義。由於實驗室檢查為非侵入性，故應用較廣，並在不斷髮展。
（一）血清門冬氨酸轉移酶AST與血清丙氨酸轉移酶ALT：
許多臟器和組織都含有血清門冬氨酸轉移酶（AST）和血清丙氨酸轉移酶（ALT）這兩種酶，兩者分佈的次序大致是ALT：肝＞腎＞心＞肌肉；AST：心＞肝＞肌肉＞腎。在肝內用ALT主要分佈於胞漿內，AST主要分佈於細胞漿和線粒體中。
在肝臟等臟器、組織損傷或壞死時，酶從細胞內逸出，進人血液。肝細胞內轉氨酶濃度比血清高1000～5000倍，在肝細胞損傷、細胞膜通透性增加時，即使無肝壞死，細胞內轉氨酶也可由於這種濃度梯差而滲漏人血中。又由於整個肝臟內轉氨酶活性比循環內總活性高 104倍，只要有1％的肝細胞壞死，便可使血中酶活性增高1倍，因此轉氨酶是肝細胞損害的敏感的標誌，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標。酒精性肝炎 AST多增高且增高明顯，增高程度不一定與肝細胞損傷成正比。酒精性肝炎即使肝損傷嚴重，ALT可呈正常或輕微增高，不是酒精性肝損傷的敏感提示。
酒精性肝炎時AST/ALT的比值改變產生的原理可能與酒精性肝炎吡哆辛缺乏有關。吡哆辛的缺乏使其代謝物吡哆醛-5-磷酸減少，後者是AST及ALT的輔酶，吡哆醛-5-磷酸受到抑制，尤以 ALT活性受抑程度大，因此AST/ALT比值增大。臨床研究發現誘導肝細胞壞死無吡哆辛缺乏時血清AST/ALT的比值為1，吡哆辛缺乏時為5。給吡哆辛缺乏組補充吡哆辛後ALT水平增高而AST不變。由此可部分說明酒精性肝損傷時不同的轉氨酶升高機制。
（二）血清γ-谷氨酰轉肽酶GGT：
血清γ-谷氨酰轉肽酶（GGT）：酒精性肝損傷時血清GGT增高。GGT主要分佈於腎、胰、肝、腸、腦等組織。它是一種膜結合酶，其功能與細胞攝取氨基酸有關，在膽管上皮細胞內活性很高，根據臟器GGT同功酶分析，肝、膽汁及血液GGT具有同一性質，故檢測的血清GGT水平增高，可能因酒精損傷肝細胞使肝細胞微粒體GGT酶釋出，而致血清中此酶含量增高。GGT酶診斷酒精性損傷的敏感性甚高，但ＧＧＴ增高的特異性不高，任何原因所致肝炎血清GGT都升高，故對確定是否為酒精損傷需要鑑別。慢性酒精中毒病人69%陽性，已增高程度較AST顯著，禁酒後此酶水平很快恢復正常，此特點對與GGT升高的非酒精性肝病鑑別有重要意義。
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